學位論文
Permanent URI for this collectionhttp://rportal.lib.ntnu.edu.tw/handle/20.500.12235/73908
Browse
8 results
Search Results
Item 系統農藥芬普尼對斑馬魚神經系統的影響(2020) 徐代軒; Hsu, Tai-Hsuan芬普尼 (fipronil) 是一種苯基吡唑類殺蟲劑，可選擇性抑制昆蟲中的γ-氨基丁酸（GABA）受體。儘管芬普尼已成為在水生環境中使用最廣泛的藥物，但很少有研究評估芬普尼的神經毒性對於水生脊椎動物的感覺和運動系統的影響。在本碩士論文的研究中，我們選擇斑馬魚（Danio rerio）實驗動物來探討芬普尼對感覺與運動系統的神經毒理作用。我們評估了急性芬普尼暴露對斑馬魚存活率，側線毛細胞數量以及神經毒性的影響，此外，我們比較了正常與芬普尼處理下斑馬魚的游泳軌跡熱圖、速度和距離的差異。我們的實驗結果發現成年斑馬魚暴露在0.5、1.0和2.0 ppm芬普尼的水中環境24小時，與正常處理斑馬魚比較，存活率隨著芬普尼濃度顯著遞減。而斑馬魚胚胎暴露在0.1、0.5和1.0 ppm芬普尼的水中環境24小時，與正常處理斑馬魚比較，側線毛細胞數量也是隨著芬普尼濃度顯著遞減。透過組織病理學和西方墨點法研究發現，成年斑馬魚暴露於1.0 ppm芬普尼的水中環境24小時，大腦組織的氧化壓力、發炎與細胞凋亡，與正常處理斑馬魚比較，則是顯著增加。通過影像追蹤觀察，成年斑馬魚暴露在0.1和0.5 ppm芬普尼的水中環境24小時，游泳軌跡的速度和距離隨著芬普尼濃度顯著遞減，儘管芬普尼的神經毒性主要針對無脊椎動物昆蟲的GABA受體而開發，但我們的研究結果發現，芬普尼不但會減低斑馬魚的存活率，還會透過損傷側線的毛細胞數量以及產生氧化壓力、發炎與細胞凋亡來損傷大腦組織來影響斑馬魚的感覺和運動系統。這結果推論系統農藥芬普尼誘導的神經毒性會損傷水生脊椎動物的感覺與運動系統。Item 探討海洋深層水對痤瘡丙酸桿菌誘發ICR小鼠耳朵皮膚發炎之改善效果(2019) 翁于晴; Weng, Yu-Ching痤瘡丙酸桿菌 (Cutibacterium acnes, P. acnes) 是一種兼性厭氧的革蘭氏陽性菌，常見於人體皮膚的皮脂腺上，然而當痤瘡丙酸桿菌不正常增生的情況下與致痤瘡的形成有關，是因為痤瘡丙酸桿菌在痤瘡的形成中，扮演促進發炎的重要角色。海洋深層水 (Deep sea water, DSW) 含有豐富礦物質與活性成分，有文獻指出海洋深層水可以預防或治療過敏性濕疹，然而目前對於海洋深層水治療痤瘡丙酸桿菌所引起的痤瘡效果未有深入的研究。因此本研究探討海洋深層水對痤瘡丙酸桿菌誘導小鼠耳朵發炎情形是否有改善進行探討。首先在體外試驗中以紙錠擴散法 (disk diffusion method) 測定海洋深層水對痤瘡丙酸桿菌的抗菌活性，加入海洋深層水的載體與加入二次水的載體凝膠進行對照，可得知海洋深層水凝膠的紙錠周圍所生長的菌落數比二次水凝膠的紙錠周圍菌落數較少，因此在體外試驗具有抑菌的效果。動物實驗部分以ICR小鼠做為實驗對象，小鼠在經過一週飼養後，將痤瘡丙酸桿菌 6*109 CFU/uL 注射於小鼠耳朵皮下組織，誘導組織形成發炎現象，接著連續5天給予塗抹海洋深層水凝膠於耳朵誘發處，透過雷射都普勒血流儀觀察，予海洋深層水凝膠的組別耳朵降低紅腫的情況明顯好於其他組，且耳朵的腫脹程度也有明顯的下降。此外在H&E染色下，可以觀察到經過海洋深層水治療後可以減少皮下組織的發炎細胞浸潤的現象。我們再以西方墨點法觀察痤瘡丙酸桿菌對組織造成發炎反應之路徑，其主要是藉由活化p38及NF-kB磷酸化蛋白，進而產生發炎現象，但在給予海洋深層水後可抑制磷酸化蛋白的表現。另外在海洋深層水抑制促發炎因子的部分，包括granulocyte- macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF)、Chemokine (C-C motif) ligand 5 (CCL5)、Chemokine (C-X-C motif) ligand 1(CXCL1)、interleukin-1b (IL-1b)、Chemokine (C-X-C motif) ligand 11 (CXCL11) 等促發炎因子之蛋白表現量有減少的趨勢。總結來說我們的結果表示經由海洋深層水治療後，能抑制MAPK 中的p38和NF-kB蛋白的磷酸化，並減少促發炎因子GM-CSF、 CXCL1、CCL5、CXCL11、IL-1b的產生，來達到降低P. acnes誘導組織發炎反應的情形，改善痤瘡丙酸桿菌引起的皮膚炎症之效果。因此海洋深層水能有效治療P. acnes誘導的發炎情形，以後可以作為痤瘡桿菌的治療選擇之一。Item 中草藥對於亨丁頓舞蹈症模式小鼠的神經保護機制(2016) 王雪娥; Wang, Sheue-Er亨丁頓舞蹈症（HD）是一種無法治癒的神經退化性疾病，儘管多年的研究，關於亨丁頓舞蹈症神經退化病變的機制仍然不清楚。中國傳統醫藥可以提供新的見解或HD的新療法。中草藥配方的B401是一個眾所周知的台美專利配方，由六種中草藥成分組成。本論文研究主要探討中草藥配方B401對於亨丁頓舞蹈症的神經保護作用。本實驗比較口服中草藥配方B401實驗組以及控制組之R6 / 2小鼠的壽命和體重；透過行為實驗比較口服中草藥配方B401對R6 / 2小鼠的改善情形；利用moorFLPI雷射都普勒成像儀測量R6 / 2小鼠的皮下微循環；利用核磁共振成像技術測量R6 / 2小鼠的腦部體積變化；利用化學發光方法測量R6 / 2小鼠血液中的反應性氧物質（ROS）；利用免疫組織化學染色和西方轉漬技術分析10週齡R6 / 2小鼠腦組織中的關於神經保護、血管生成、氧化壓力，發炎反應和細胞凋亡相關的蛋白質表現，我們的研究結果顯示R6 / 2小鼠口服B401後會延長生存時間、降低體重損失、並且提高運動能力。此外，B401處理也會增強R6 / 2小鼠皮下的微循環；緩解大腦、中腦和小腦的萎縮；並且降低血液中的ROS生成。從我們的研究顯示，口服B401治療顯著增加R6 / 2小鼠腦組織當中的BDNF、VEGF、以及SOD2的表現；但是降低亨丁頓蛋白聚集以及TNF-α的表現。此外，口服B401治療也顯著增加R6 / 2小鼠腦中Bcl-2的表現，但是顯著降低BAX、Calpain、以及Caspase 3的表現。我們的研究顯示口服B401治療亨丁頓舞蹈症R6 / 2小鼠的神經保護機制主要是通過增強神經與血管的新生，但是抑制興奮性毒殺，氧化壓力，發炎反應與細胞凋亡。因此我們認為中草藥配方B401應該可以開發成為改善亨丁頓舞蹈症神經退化性疾病的有效保健品。Item 中草藥對於亨丁頓舞蹈症R6/2小鼠的心臟保護機制(2016) 林清隆; Lin, Ching-Lung亨丁頓舞蹈症是一種遺傳性的神經退化疾病，其特徵在於認知和運動功能的障礙。亨丁頓舞蹈症被認為主要是一種神經退行性疾病；然而，心臟衰竭也是亨丁頓舞蹈症患者的主要死亡原因。許多發生在亨丁頓舞蹈症患者神經元當中的病症，如：粒線體功能障礙和代謝損傷，也會發生在亨丁頓舞蹈症患者的心肌細胞當中。然而，用於保護亨丁頓舞蹈症患者心臟功能的臨床藥物卻很少。在國內，有許多中草藥物可以透過刺激血液循環以及補充細胞能量來緩解心血管疾病；為此，這些中草藥應該可以應用於減輕亨丁頓舞蹈症患者的心臟衰竭。在台灣，中藥配方B307是保護心血管功能的知名保健漢方藥品。本論文探討口服中藥配方B307對於R6/2亨丁頓舞蹈症基因轉殖小鼠的心臟保護作用。R6/2小鼠每日口服中藥配方B307或媒介物，飲食治療兩週。然後，透過非侵入性的心臟超聲波影像和moor FLPI雷射都普勒成像儀器，檢視10週齡R6/2小鼠的心臟功能以及皮膚組織的微循環，接著我們利用免疫組織化學和西方轉漬分析，檢查R6/2小鼠心臟組織中特定蛋白質表現，本論文結果顯示，R6/2小鼠的心臟功能以及皮膚組織在服用中藥配方B307後均獲得顯著改善。並且，R6/2小鼠心臟組織的心肌發炎以及亨丁頓蛋白累積，在服用中藥配方B307後也獲得顯著改善。此外，R6/2小鼠服用中藥配方B307後，心臟組織的VEGF、eNOS、SOD2和Bcl-2的蛋白質表現會顯著增加，而TNF-α、3-NT、4-HNE、Bax、Calpain、Caspase 12、Caspase 9、Caspase 3的蛋白質表現則會顯著降低。由本論文研究發現口服中藥配方B307會有效減輕R6/2小鼠心臟組織的氧化壓力、發炎反應以及細胞凋亡的進程。因此，口服中藥配方B307應該可以通過這些保護機制而達到改善亨丁頓舞蹈症患者的心臟功能失調；因此中藥配方B307可能開發成為改善亨丁頓舞蹈症心臟衰竭的保健漢方藥品。Item 傳統中醫藥緩解錳中毒的治療潛力(2016) 徐志翔; Hsu,Chih-Hsiang本論文的主要研究目的為探討傳統中醫藥是否具有緩解錳中毒的治療潛力。過去文獻指出錳礦工人會因為吸入大量的錳而引起神經系統中毒以及勃起障礙的症狀，人體如果攝取過量的錳也會造成嚴重的神經系統疾病、行動障礙、心智和情緒的異常，嚴重的錳中毒甚至誘發類巴金森症候群。然而，臨床上利用西方藥物治療人體錳中毒的效果卻相當有限，如果選擇傳統中醫篩選緩解錳中毒的中草藥，則為錳中毒患者帶來替代治療的希望。為此，本研究選擇具有緩解發炎與氧化壓力的中藥配方B401，利用口服餵食錳毒處理的實驗雄鼠，探討中藥配方B401是否具備緩解錳中毒的治療潛力。本實驗選用的中藥配方B401，首先利用高效液相層析儀分析中藥各個配方的有效成分，再利用MTT分析檢視中藥配方B401的半抑制濃度；確定中藥配方B401的有效成分與半抑制濃度後，本實驗選用50隻ICR雄鼠，分為正常飲食(Sham)、錳毒處理(Mn)、餵食中藥配方B401 (B401)、以及餵食中藥配方B401加錳毒處理(B401+Mn)四組。實驗處理過程中，利用滾輪運動實驗檢視四組小鼠的運動與平衡能力，最後四組小鼠分別給予麻醉藥物處理後，採集小鼠血液，利用化學發光分析法檢視並且比較血液中活性氧化物質，同時利用多功能電化學偵測儀檢視並且比較陰莖組織一氧化氮的含量；隨後利用心臟灌流方式犧牲，採集四組小鼠的腦部與陰莖組織，再利用免疫組織化學染色以及西方轉漬方法檢視腦部與陰莖組織的相關蛋白質表現。實驗結果顯示ICR雄鼠給予錳毒處理後，會顯著增加血液中活性氧化物質(ROS)表現以及降低陰莖組織中一氧化氮(NO)的含量；從免疫組織化學染色以及西方轉漬方法的結果發現，ICR雄鼠給予錳毒處理後，會顯著降低腦部組織中多巴胺、多巴胺接受器、以及大腦神經生長因子(BDNF)的表現，以及降低陰莖組織中神經型一氧化氮合酶(nNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表現；此外，ICR雄鼠給予錳毒處理後，對於腦部與陰莖組織均會增加氧化壓力、發炎反應以及細胞凋亡作用的標記蛋白表現。當ICR雄鼠預先餵食中藥配方B401，再給予錳毒處理，相較於單獨錳毒處理的ICR雄鼠，血液中ROS表現會顯著降低，陰莖組織中NO的含量則是改善增加；從免疫組織化學染色以及西方轉漬方法的結果發現，預先餵食中藥配方B401會使錳毒處理的ICR雄鼠腦部組織中多巴胺、多巴胺接受器、以及BDNF的表現會顯著回升；陰莖組織中nNOS、eNOS的表現也會顯著回升；此外，預先餵食中藥配方B401會使錳毒處理的ICR雄鼠腦部組織與陰莖組織的氧化壓力、發炎反應以及細胞凋亡作用的標記蛋白表現顯著下降。由以上實驗結果發現，ICR雄鼠口服中草藥配方B401可以透過促進腦部組織中多巴胺以及BDNF的表現，以及緩解腦部的氧化壓力、發炎作用與細胞凋亡反應來緩解錳毒引發的神經系統毒性；此外，ICR雄鼠口服中草藥配方B401可以透過增加陰莖組織中NO、nNOS、eNOS的表現，以及緩解陰莖組織的氧化壓力、發炎作用與細胞凋亡反應來緩解錳毒引發的陰莖毒性。因此，本論文結果認為中草藥配方B401應該具有緩解錳毒引起之神經毒性或是生殖毒性的醫療潛力。Item 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶引發臺灣葉鼻蝠腦組織的神經損傷(2019) 吳婉溱; Wu, Wan-Jhen帕金森氏症 (Parkinson’s disease)是一種影響運動的神經退行性疾病，臨床表現包括顫抖、肌肉僵直以及步態遲緩，病理特徵是中腦黑質組織內多巴胺神經細胞的退化及死亡。過去帕金森氏症動物模式常採用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶 (MPTP)，導致帕金森氏症疾病模式。MPTP是一種親脂性的原毒素，以腹腔注射後即迅速穿過血腦屏障。一旦進入大腦，MPTP被星形膠質細胞攝取並通過單胺氧化酶-B (MAO-B)轉化為中間體1-甲基-4-苯基-2,3-二氫吡啶鎓 (MPDP)。然後再通過紋狀體神經元多巴胺D1接受器的蛋白將MPDP傳入紋狀體神經元。多巴胺神經元中的細胞質MPP抑制線粒體電子傳遞鏈的複合物I +然後將+快速且自發地氧化成毒性部分1-甲基-4-苯基吡啶鎓 (MPP + ; Chiba，Trevor，＆Castagnoli，1984)。之後，MPP + +並導致ATP耗盡和氧化應激增加。出於這個原因，MPP +還選擇性地殺死多巴胺神經元 (Oxidative Stress and Neurodegenerative Disorders, 2007)。本論文選擇臺灣葉鼻蝠作為動物模式，腹腔連續注射MPTP一週後，利用免疫組織化學與西方墨點法分析蝙蝠中腦黑質與大腦基底核周邊的神經組織，檢視是否有類似帕金森氏症的表現。實驗結果顯示，中腦黑質神經細胞內合成多巴胺的相關酵素-芳香族L-胺基酸脫羧酶(AADC)表達減少；而且黑質神經細胞內發炎作用相關蛋白腫瘤壞死因子-α (TNF-α)、氧化壓力相關蛋白-3-硝基酪氨酸 (3-NT)及細胞凋亡相關蛋白-細胞淋巴瘤聯結X蛋白(BAX)、半胱天冬酶原3 (Caspase 3)表達增強；而黑質神經細胞內抗氧化壓力相關蛋白-超氧化物歧化酶 2 (SOD 2)與抗細胞凋亡相關蛋白-細胞淋巴瘤蛋白-2 (Bcl-2)表達降低；此外，基底核內紋狀體神經細胞多巴胺D1接受器蛋白表達減少。綜合上述研究結果，本論文實驗初步證實MPTP處理的回聲定位，蝙蝠確實會因為MPTP誘發黑質神經細胞產生發炎反應、氧化壓力、以及細胞凋亡，進而導致腦內黑質神經細胞損傷。由於MPTP實驗處理會使得回聲定位蝙蝠產生運動失調，此現象類似帕金森氏症病徵，這結果說明利用MPTP處理回聲定位蝙蝠的動物模式，未來應該可以作為探討帕金森氏症相關研究的新穎實驗動物平台。Item 以神經微膠細胞發炎反應為標的之阿茲海默氏症治療策略(2017) 謝育軒; Hsieh, Yu-Hsuan阿茲海默氏症是常見的漸進性神經退化性疾病，主要病理特徵包括細胞外間質的β類澱粉樣纖維(Aβ fibril)堆積，及細胞內高度磷酸化tau形成的神經纖維糾結。目前對於阿茲海默氏症致病機制仍未完全了解，患者也無法被完全治癒，因此發展阿茲海默氏症的治療策略是相當重要的。近年研究顯示神經發炎反應在阿茲海默氏症上扮演重要的角色，因此抑制神經發炎反應已成為治療阿茲海默氏症的重要標的。與發炎反應相關的微膠細胞是中樞神經的免疫細胞，具有典型的M1 (發炎反應)及替代的M2 (免疫抑制)兩種活化路徑，因此調節微膠細胞活化狀態已被認為是治療神經發炎性疾病的策略。先前本實驗室於脂多醣(LPS)刺激的RAW264.7小鼠巨噬細胞實驗，發現化合物VB-030、037能降低一氧化氮(NO)、TNF-α、IL-1β、PEG2等發炎因子的釋放。延續此發現，本研究首先利用LPS或β類澱粉樣纖維刺激BV-2微膠細胞模式，探究化合物VB-030、037的抗發炎能力，結果發現VB-037能顯著降低LPS/β類澱粉樣纖維刺激BV-2細胞之NO及Iba1蛋白表現，表示VB-037具有抗β類澱粉樣纖維誘導細胞發炎的潛力，同時也利用小鼠發炎抗體矩陣(Mouse inflammation antibody array)揭示VB-037之抗發炎標的IL-1α，並利用西方轉漬分析證實VB-037能顯著降低活化之BV-2細胞之促發炎因子IL-1α。為了測試VB-037對於神經細胞的保護效果，我們利用受發炎刺激之BV-2細胞制約培養液或共處理發炎因子LPS與IFN-γ，建構誘導表現Aβ-GFP融合蛋白的人類SH-SY5Y神經母細胞瘤細胞發炎模式，實驗結果發現VB-037能提升表現Aβ-GFP融合蛋白的SH-SY5Y之細胞存活率，降低細胞損傷後之乳酸脫氫酶(LDH)釋放量，並促進神經突生長，同時前處理VB-037能降低受LPS與IFN-γ刺激之SH-SY5Y細胞IL1A及磷酸化P38 (T180/Y182)、JNK (T183/Y185)、JUN (S63、S73)蛋白表現量。綜合本研究的發現，VB-037具有抗β類澱粉樣纖維誘導之神經發炎作用及神經保護作用，有潛能發展為抗β類澱粉樣纖維誘導神經發炎之新穎藥物。Item 海藻糖芭樂汁對第二型尿病大鼠之腎臟及胰的保護效應(2015) 郭彥廷; Kuo, Yen-Ting第二型糖尿病(Type 2 diabetes, T2DM)是目前廣泛流行的代謝症候群。研究預測第二型糖尿病的人口數，在西元2030年時會攀升至3.66億。芭樂 (Psidium guajava)，被發現具有抗氧化(anti-oxidation)、抗發炎(anti-inflammation)及抗糖尿病(anti-diabetes)的特性。並且也被發現在第一型糖尿病的大鼠上，可以保護胰臟的β細胞，免於受到氧化壓力損害。然而，很少研究是利用芭樂的可食部位探討其對第二型糖尿病之間的作用機制。所以我們利用芭樂可食部位製成芭樂汁(40%)，以研究此主題。為了提升芭樂汁的適口性，我們在果汁當中添加了海藻糖(Trehalose)。海藻糖是一種雙醣，目前已被應用為細胞冷凍保存的工具。先前的研究指出它可以防止阿茲海默症中，類澱粉蛋白的累積。以及亨丁頓氏舞蹈症中，多聚谷氨酰胺的形成而產生抗氧化之作用。本研究之主要目的在評估芭樂汁(40%)添加海藻糖(5%)對於第二型糖尿病大鼠在腎臟與胰臟的保護作用效應。 利用Nicotinamide (NA)及Streptozotocin (STZ)腹腔注射以誘發 Wistar品系雌性大鼠第二型糖尿病。誘發成功後，分為六組進行實驗，分別為CON, DM, T1, T2, T5和B1。每日灌餵芭樂汁，連續四周。灌餵之劑量如下: T1, T2, T5: 4, 8, 20 ml/kg BW芭樂汁含5%海藻糖。 B1: 4 ml/kg BW芭樂汁不含5% 海藻糖。紀錄葡萄糖耐受性試驗(OGTT)、血清胰島素、糖化血色素與換算之胰島素阻抗和分泌量。並測量腎臟活體自由基，而後進行犧牲，收取組織進行免疫組織染色、螢光染色、西方墨點法及離體血清自由基測試。我們亦以LC/MS的方式定量芭樂有效成份。 結果顯示，芭樂汁中含有高量的槲皮素，且槲皮素與芭樂汁可清除H2O2 and HOCl。而本研究也發現，海藻糖可清除H2O2，但無法清除HOCl。第二型糖尿病(DM組)會增加大鼠之氧化壓力及發炎反應。相較之下，T1, T2, T5組在灌餵海藻糖芭樂汁之後，表現出較低程度的氧化壓力及發炎指標，如IL-1β, Caspase 3及4-HNE。第二型糖尿病(DM組)增加胰島素阻抗和降低胰島素分泌量。相較之下，T1, T2, T5組在灌餵海藻糖芭樂汁之後，會降低第二型糖尿病(DM組)所增加之腎臟和胰臟氧化壓力及發炎反應包括降低IL-1β, Caspase 3 及4-HNE之表現。而且會降低胰島素阻抗和部份增加胰島素分泌量。此外，我們發現在離體血清自由基測試中，B1組的血清自由基較T1, T2, T5組高，其中T2及T5組統計達顯著差異(P< 0.05)。免疫組織染色及螢光染色結果也有相同趨勢。這結果表示海藻糖芭樂汁對於腎臟及胰臟的保護功效，較單獨芭樂汁佳。 總結，海藻糖可以提升芭樂汁在第二型糖尿病中的保護功效。將兩者合併攝取，可降低腎臟及胰臟的氧化壓力及發炎反應。