學位論文
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Item 新生期投予地塞米松對於成年雌性大鼠 海馬迴 G 蛋白偶合雌激素受體之影響(2019) 羅子雅; Lo, Tsz-Nga地塞米松（dexamethasone, DEX）是一種合成的糖皮質激素，通常用作消炎藥物。它亦被廣泛用於早產兒身上（prematurely born infant），以治療早產嬰兒的慢性肺部疾病（chronic lung disease)。新生期投予地塞米松治療（neonatal dexamethasone treatment, NDT）已被廣泛研究並證明對中樞神經系統具有長期的不良反應。我們先前的研究結果顯示，新生期投予地塞米松治療（neonatal dexamethasone treatment, NDT）對於成年雄性和青春期雌性大鼠均引起類憂鬱行為（depression-like behavior）的顯著增加。然而，新生期投予地塞米松治療，對成年雌性大鼠的長期影響仍有待探討。除了傳統的alpha （ER）和beta（ER） 型雌激素受體外，G蛋白偶合雌激素受體（G protein-coupled estrogen receptor, GPER舊稱為GPR30）亦廣泛分佈於生殖系統、心血管系統和腦組織中，尤其是在海馬迴（hippocampus）中有大量表現。前人的研究發現GPER是一種位於細胞膜上的雌激素受體，在乳腺、血管內皮細胞及生殖系統相關癌症中呈現異常的表現及作用。然而，對於GPER的神經作用，特別是對行為的影響及作用機制仍待探究。GPER是否會影響海馬迴長期增益效應（long-term potentiation, LTP）的形成？以及杏仁核（amygdala）是否會受到NDT影響？還有待進一步研究。本研究之主旨在為探討GPER是否參與NDT對雌性大鼠產生的長期不良影響。 在此研究中，出生第1天至第3天（postnatal day 1 to 3）對雌性幼鼠以皮下注射方式（subcutaneous injection）投予遞減劑量（0.5, 0.3,& 0.1 mg/kg）的DEX。爾後於10週齡時進行一系列的行為、生化以及電生理實驗。例如以強迫游泳實驗（forced swim test, FST）和蔗糖糖水偏好實驗 （sucrose preference test, SPT） 來評估NDT所誘發的類憂鬱行為。此外使用開放空間測試（open field test, OFT）來評估DEX的非專一效應 (non-specific effect)。為了防止行為實驗對生化分析所造成之干擾，我們以相同的方式準備了另外一批動物，於十週齡時斷頭犧牲，取出其海馬迴進行即時定量聚合酶連鎖反應（real-time polymerase chain reaction, qPCR）分析ERα、ERβ和GPER的表現。部分動物則用於離體胞外電生理記錄實驗 (in vitro extracellular recording)，以檢測海馬迴腦切片中，由高頻電刺激（high-frequency stimulation, HFS）所誘發的長期增益效應（long-term potentiation, LTP），並以直接灌流方式（suprafusion）投予GPER的選擇性致效劑 （selective agonist） G1，評估G1是否能挽回海馬迴中的LTP。再以直接灌流方式（suprafusion）投予GPER的選擇性拮抗劑 （selective antagonist） G15，評估G15是否能阻斷G1所挽回海馬迴中的LTP。 實驗結果顯示，NDT雌鼠在FST中的不動的時間百分比(percent time of immobilization) 明顯增加，而SPT的結果亦顯示其蔗糖偏好指數(sucrose preference index)明顯降低，但NDT與控制組在OPT中的水平運動距離(total horizontal moving distance)並無明顯差異，此項結果顯示NDT成年雌性大鼠的類憂鬱行為增加，應與DEX的非專一效應對活動能力之干擾無關。在qPCR的結果顯示，青少年期時雌性NDT大鼠海馬迴中ER、ER和GPER的表現量，與控制組相比並無明顯差異。然而，在成年期NDT雌性大鼠的海馬迴中GPER的表現量則明顯減少。離體胞外電生理記錄的結果顯示，成年期NDT雌性大鼠海馬迴中，HFS-LTP的強度顯著降低，而在表面灌流GPER的選擇性致效劑G1後，NDT雌鼠海馬迴之LTP可恢復至正常水平，並且在表面灌流GPER的選擇性拮抗劑G15後G1的拯救效果被完全阻斷。 總結各項實驗結果，GPER在NDT對海馬迴中LTP之異常表現中，扮演了十分重要的角色。後續的研究可針對G1是否亦能對NDT所引發的行為異常，具有治療效果進行進一步的探討。利用藥第投予恢復海馬迴中GPER的表現量，或是利用GPER的選擇性致效劑，極可能對NDT所造成之行為異常，具有治療的效果，未來可朝此二個方向進行藥物研發。 關鍵詞: 地塞米松、海馬迴、G 蛋白偶合雌激素受體、長期增益效應Item 新生期投予 Dexamethasone 對於成年期母鼠杏仁核功能之影響(2012) 鄭瓊音; Chiung-Yin Cheng臨床研究發現，新生時期接受糖皮質類固醇藥物治療的早產兒，於兒童期及青少年期容易發生神經發育及功能異常；且研究指出，在老鼠新生期投予 dexamethasone (DEX)，會造成腦部杏仁核 (amygdala) 發育不正常有缺陷的現象，以及類憂鬱傾向的行為。台灣衛生署國民健康局統計國內兩萬多名的樣本數中，女性發病的機率為男性的 1.8 倍。女性容易出現憂鬱症的原因，可能與女性的生理週期和體內雌激素 (estrogen) 的濃度變化有關，而過去的研究也發現 DEX 的投予會影響杏仁核等腦區雌激素受體 (estrogen receptor, ER) 的表現量及活化後之反應機制。 本研究於新生鼠出生後第一天到第三天，每天接受一次皮下注射 DEX，並且在出生後每週測量體重一次，以觀察動物的生長情況，結果顯示 DEX 組的動物體重有明顯下降的現象，但在八週齡後此現象改善。進行離體胞外電生理紀錄，探討新生期投予 DEX，對青少年期及成年期雌鼠杏仁核長期增益現象 (long-term potentiation, LTP) 之影響，結果顯示新生期投予DEX之雌鼠於六週齡時，杏仁核長期增益現象會被抑制，此抑制現象於十週齡仍可見。強迫游泳測試 (forced swimming test, FST) 發現六週齡與十週齡 DEX 組雌鼠類憂鬱行為有增加的現象。西方墨漬法探討新生期雌鼠投予 DEX 後雌激素受體的變化，結果顯示六週齡及十週齡 DEX 組雌鼠杏仁核之雌激素α型受體 (estrogen receptor alpha, ERα) 的表現量明顯減少，而杏仁核之雌激素β型受體 (estrogen receptor beta, ERβ) 沒有變化。在本研究第二階段實驗，離體胞外電生理紀錄中，給予腦片表面灌流 20 分鐘的雌二醇 (estradiol, E2) 後，六週齡和十週齡 DEX 組雌鼠杏仁核的長期增益現象有回復的情況；強迫游泳行為測試，在行為前四天給予動物皮下注射 E2，六週齡的 DEX 組雌鼠類憂鬱行為有下降的傾向，但是十週齡的雌鼠則沒有明顯回復。 綜合以上實驗結果，新生期 DEX 的投予，會對雌鼠杏仁核之神經傳導與神經突觸可塑性造成不良影響，以及增加其類憂鬱行為，而且此影響會延續至雌鼠成年期。藉由 E2 的給予，可以降低新生期 DEX 的投予對雌鼠杏仁核功能之影響，以及减少雌鼠青少年期之類憂鬱行為。藉由此研究所得之成果，可提供 DEX 在臨床上用藥的安全考量和治療上的參考。