學位論文
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Item 轉錄因子SPZ1透過BRAF促進肝癌中的腫瘤生長(2023) 林佳霓; Lin, Jia-Ni肝癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）是一種常見的惡性腫瘤，也是世界上最常見的癌症死亡原因，其預後差且復發率高。然而，目前對於肝腫瘤形成的詳細機制尚不清楚。轉錄因子Spermatogenic leucine zipper 1（SPZ1）是一種致癌基因，在精子發生過程中扮演重要角色，包括細胞生長和分化。先前的研究已發現SPZ1受到上游RAS-MAPK訊息傳遞路徑調控，從而導致癌細胞增生和腫瘤形成。然而，對於SPZ1如何調控下游基因的機制尚不清楚。BRAF為一種致癌基因，透過MAPK訊息傳遞路徑調控癌細胞生長、增生和存活。因此，我們提出SPZ1可能透過BRAF來調控腫瘤生長的假設。我們首先檢測197位肝癌患者的腫瘤與非腫瘤檢體中SPZ1及BRAF表現，結果發現在腫瘤組織中SPZ1與BRAF均有高度表現。另外，我們比較了SPZ1與BRAF表現在肝癌患者中臨床病理特徵的相關性，並進行存活分析，發現高度表現SPZ1與BRAF對於病人的預後較差。此外，我們觀察到SPZ1與BRAF mRNA表現呈中度正相關。為了確認SPZ1是否為BRAF的目標基因，我們利用shRNA在Huh7和SK-Hep1中抑制了SPZ1的表現。結果顯示，當抑制SPZ1表現時，BRAF蛋白質表現也隨之減少。接著，我們將不同片段的BRAF promoter接合上含有Luciferase gene的pGL4質體，並與含有SPZ1的質體共轉染到肝癌細胞株中。透過冷光素酶檢測法，我們發現SPZ1可能與BRAF promoter 的-200到-61位置處結合。最後，我們進一步研究了過度表達SPZ1和SPZ1/shBRAF對肝癌細胞生長的影響。結果顯示，SPZ1可能透過BRAF來調控細胞生長。綜上所述，我們的研究結果顯示，在肝癌發展中，SPZ1扮演著重要的角色，可能透過BRAF來促進細胞增生。未來的研究將繼續探索SPZ1/BRAF訊息傳遞路徑在肝癌細胞發展中的功能。Item The effect of Chinese herbal medicine on migration and proliferation of liver cancer cells(2010) 金承勳; Kim, seunghun腫瘤細胞中，與基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）抑制劑可藉由許多不同的訊息傳遞路徑，達到具有抑制血管新生及細胞增生的效果。過去對於中草藥調節血管新生的作用機轉較少被探討。本研究使用各種不同中草藥投至人類肝癌細胞（HepG2，Hep3B及Huh 7），先以細胞存活率試驗及流式細胞儀篩選具生長抑制的藥物。實驗結果顯示，夏枯草最具抑制轉移的中草藥，它可藉由抑制MMP-9及MMP-2的蛋白質表現以抑制其蛋白質活性，此外也由wound healing assay及zymography證實這項實驗結果。 本論文根據過細胞模式上的研究成果，初了強化過去的研究外，也會繼續進行動物層次研究，積極由肝癌腫瘤之實驗動物的數據，篩選出未來值得推廣至產業界發展的中草藥，計畫並會開始分析活性中草藥成份活性。以期達承建立以「證據基礎」的目標，證實中草藥之抗肝癌血管新生與轉移功能。Item 以肝癌細胞為模式篩選具有調節血管新生相關因子的中草藥(2008) 路淑怡; Shu-Yi Lu腫瘤細胞中，血管內皮細胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）與基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）抑制劑可藉由許多不同的訊息傳遞路徑，達到具有抑制血管新生及細胞增生的效果。過去對於中草藥調節血管新生的作用機轉較少被探討。本研究使用各種不同中草藥投至人類肝癌細胞（HepG2及Huh 7），先以細胞存活率試驗初步篩選具生長抑制的藥物。實驗結果顯示，香蘇散及黃連解毒湯為複方中最具效力的待測中草藥。香蘇散能夠降低VEGF的蛋白質表現，並可藉由抑制MMP-9的RNA與蛋白質表現以抑制其蛋白質活性；初步判斷，其有效單方紫蘇葉藉由抑制VEGF表現以及MMP-9的活性以降低肝癌細胞的侵犯與血管新生作用。 黃連解毒湯可以抑制β-catenin的蛋白質表現，其有效單方黃連，除了能抑制β-catenin蛋白質表現外也會調降MMP-9的蛋白質表現與活性。 另外，單方藥物：石上柏、夏枯草、鴨膽子、苦參與黃獨均能抑制肝癌細胞生長；其中，夏枯草與黃獨亦能抑制VEGF表現，而鴨膽子與苦參是藉由抑制MMP-9及β-catenin的蛋白質表現以抑制肝癌細胞的侵犯與血管新生作用。 本實驗以蛋白質體學的方法，篩選具有調節肝癌血管新生相關因子的中草藥，達到中草藥實證效應的目標。Item 透過活化p53引起人類非小細胞肺癌與肝癌細胞凋亡的吲哚喹嚀基藥物與其作用機制的探討(2016) 劉俊彥; Liu, Chun-Yen肺癌是全世界癌症中死亡率第一的癌症。非小型細胞肺癌（NSCLC）佔肺癌病患的比例約75％至80％。化療所造成的副作用與抗藥性在肺癌治療中是有待處理的棘手問題。因此發展出新的抗癌藥物對肺癌的病患是有必要的。此篇論文旨在篩選可抑制肺癌細胞生長新穎的合成化合物。透過MTT的分析方式鑑定EMMQ對非小型肺癌細胞的IC50的濃度。數據顯示低濃度的EMMQ即可減少A549和H460此兩種非小型肺癌細胞的生長速率。研究也證明，EMMQ可誘導具有正常p53基因的非小細胞肺癌的細胞凋亡，而且該藥物對p53-null的非小細胞肺癌則無明顯的效果。研究顯示EMMQ會誘導細胞DNA損傷，活化p53蛋白，干擾粒線體的膜電位而釋放細胞色素c，造成Bcl-2的下降，活化caspase-3， 讓PARP裂解而造成的內生性細胞凋亡。活體的實驗證明，EMMQ可以抑制裸鼠異種移植腫瘤的生長。最後，此研究證實EMMQ可在低濃度時活化非小細胞肺癌細胞的p53而造成細胞凋亡。此外，本研究還發現EMMQ可抑制具有正常 p53基因之非小細胞肺癌細胞的細胞轉移。因此本論文的數據顯示EMMQ可能成為一種新穎且有潛力的人類肺癌治療藥物。 肝癌是世界排名第五大常見的癌症。臨床顯示治療這些肝癌腫瘤中的重要的限制是治療過程中化療藥物長久投藥後的失效且肝癌對這些藥物產生抗藥性的問題。因此，開發肝癌治療中所產生化療失效與抗藥性的抗癌藥物是迫切需要的。之前我們已經確認EMMQ於肺癌細胞與活體的模式中是有效治療的效果。在此研究中證明EMMQ可抑制肝癌細胞的細胞生長進而誘導細胞凋亡。 EMMQ誘導的細胞凋亡為wild type p53的肝細胞癌（HCC）細胞，但是對mutant p53和p53-null細胞不敏感。數據顯示此化合物以內源性的途徑方式誘導細胞死亡。研究證明了EMMQ通過兩個主要途徑誘導細胞凋亡。此化合物使HepG2細胞的DNA損傷進而活化p53和γ-H2AX，降低cyclin D1和CDK 2的表現，導致細胞週期於G1期停滯。其次，此化合物使腫瘤抑制基因p53活化，干擾粒線體膜電位，使得ROS產生，Akt與 Bcl-2表現降低，Bax和細胞色素c的釋放，讓caspase-3和PARP裂解。細胞實驗的結果證明，在肝癌的治療上，EMMQ是一個有潛力的抗癌藥物。Item 消除人類癌腫瘤幹細胞的藥物(2017) 金承勳; Seung-Hun Kim第一部分: 利用鴉膽子水溶液萃取物清除突變上皮細胞生長因子接受體人類肺癌細胞 中文摘要 從古以來，傳統草藥已經被大部分的中國人作為常用藥物，也是東方國家廣泛接受的藥物。非小細胞肺癌是最常見的肺癌類型，早期很難被診斷出。突變的表皮生長因子受體已經成為新型抗癌治療的分子標靶。本論文所使用鴉膽子水溶液萃取物有效地減弱了在非小細胞肺癌具有突變EGFR L858R/T790M的生長。癌幹細胞具有抗藥性，轉移和癌症復發，並且可以影響腫瘤治療的發展。重要的是，抗藥性使腫瘤更惡化。本論文也探討了鴉膽子水溶液萃取物對非小細胞肺癌的癌幹細胞的療效與反應機制。鴉膽子水溶液提取物是具可以成為非小細胞肺癌放射性治療有潛力的藥物。 第二部分: 發展teroxirone成為有效治療肝癌細胞的藥物 中文摘要 Teroxirone (1,3,5-tris((oxiran-2-yl)methyl)-1,3,5-triazinane-2,4,6-trione)是三環氧化物抗腫瘤劑，此研究目的是確定teroxirone如何調控與凋亡相關的細胞死亡。 利用MTT檢測三種肝細胞癌細胞系：Huh7（突變體p53），HepG2（野生型p53）和Hep3B（p53-缺失型） assay(細胞存活檢測) 細胞存活率，利用流式細胞儀及西方點墨法觀察凋亡所導致的細胞死亡。本研究發現在Huh7 細胞所引起凋亡的細胞死亡是透過外在途徑。Teroxirone 可以誘導從Huh7腫瘤球體所純化出來的腫瘤幹細胞的凋亡並抑制Huh7腫瘤球體幹細胞特性。Item 探討具有保護正常細胞免於順鉑毒殺作用的中草藥(2019) 陳信益; Chen, Hsin-Yi順鉑為最常用於治療癌症的化學治療藥物，但具有腎臟毒性和神經毒性。因此，找到能夠與順鉑協同抑制癌細胞生長，又能降低順鉑對正常細胞毒性(特別是神經細胞)的藥物是很重要的。中草藥在中國已被廣泛使用數千年，其藥效相較於西藥來得溫和，現今也有研究指稱它具有保護正常細胞免於化療藥物的毒殺效果。因此，我們以肝癌細胞株Hep3B和卵巢癌細胞株SKOV3建立癌症模型，並使用神經瘤細胞株SH-SY5Y建立神經細胞平台，以篩選可保護神經細胞免於順鉑毒殺作用的中草藥萃取物。初步篩選後，茯苓及天麻兩種中草藥萃取物能夠抑制Hep3B和SKOV3的生長，並且對於經維生素A酸刺激分化過的神經母細胞瘤SH-SY5Y細胞沒有毒性。根據以上實驗結果，茯苓及天麻可望成為與順鉑一起作用的複方，並期許其未來可應用於臨床治療。