學位論文
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Item 1. 探討夏枯草抑制非小細胞肺癌細胞轉移機制 2.篩選以細胞自噬去除神經細胞堆積多麩胺酸的小分子新穎化合物(2012) 黃中岳; CHUNG-YUEH HUANG1. 癌症是由於體細胞複製脫離正常的調控而不斷快速複製異常細胞的現象。異常增生的細胞形成腫瘤侵入週邊組織持續擴大並影響原發部位的器官功能及壓迫周遭器官；而癌細胞進入人體的血液循環以及淋巴系統轉移至其它部位增生，更是具有威脅性。 癌細胞的轉移，與分解細胞外基質(extracellular matrix, ECM)，以及促進血管新生的能力有很大的關聯。而在這些過程中，基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)扮演了一個十分重要的角色。 本研究利用中草藥處理人類肺腺癌細胞株(A549、H460及H1299)以及以化學合成藥物處理p53 mutation 之肝癌細胞株(Huh7)。實驗首先利用gelatin zymography assay篩選出具有抑制MMP-9與MMP-2活性能力之藥物，並以western blot觀察細胞懸浮液MMP-9與MMP-2的表現量。接著觀察藥物是否對細胞有毒性，再以wound healing assay觀察癌細胞移動能力的影響；最後以invasion assay觀察中藥對腫瘤細胞的侵入能力的影響。綜合以上的實驗結果看出，夏枯草能夠對肺癌細胞的MMP-9與MMP-2活性產生抑制效果，而且可以抑制肺癌細胞的入侵以及移動能力，在H460細胞株上的效果較為顯著，且藥效不會因p53的狀態而受到影響。另外本次實驗並沒有在所試驗的化學合成藥物中觀察到具抑制MMP活性的合成藥物。 2. 細胞自噬(autophagy)是細胞一個重要的維持細胞生存的方式。細胞透過這個過程，清除細胞中非必要的物質，以取得胺基酸等營養物質，也避免細胞異常的物質累積。自噬過程中，細胞會將目標物質包覆在雙層膜節構中形成自噬體(autophagosome)，再與溶酶體(lysosome)融合，降解目標物質，並且回收營養物質和能源。 Polyglutamine (polyQ) disease是一種在神經性退化症，其主要的病因是在基因中出現CAG或CUG的重複序列的異常增加。目前已經證明藉由調控自噬作用的藥物在polyQ disease，如亨丁頓氏症 (Huntington’s disease)小鼠模型可以減輕其毒性，因此增強自噬作用的藥物，可能會是對這種疾病的治療方式。 本論文轉殖了結合不同長度polyQ的綠色螢光蛋白基因之SK細胞株，將穩定的細胞株用各種合成化學物質複合物進行處理之後，使用螢光染色，觀察自噬體是否增加且觀察對細胞存活的影響。本論文初步篩選出了三種能夠誘導細胞自噬增加並減少polyQ堆積的小分子化合物。未來研究會再繼續確認細胞自噬對清除細胞polyQ堆積的機制。Item The effect of Chinese herbal medicine on migration and proliferation of liver cancer cells(2010) 金承勳; Kim, seunghun腫瘤細胞中，與基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）抑制劑可藉由許多不同的訊息傳遞路徑，達到具有抑制血管新生及細胞增生的效果。過去對於中草藥調節血管新生的作用機轉較少被探討。本研究使用各種不同中草藥投至人類肝癌細胞（HepG2，Hep3B及Huh 7），先以細胞存活率試驗及流式細胞儀篩選具生長抑制的藥物。實驗結果顯示，夏枯草最具抑制轉移的中草藥，它可藉由抑制MMP-9及MMP-2的蛋白質表現以抑制其蛋白質活性，此外也由wound healing assay及zymography證實這項實驗結果。 本論文根據過細胞模式上的研究成果，初了強化過去的研究外，也會繼續進行動物層次研究，積極由肝癌腫瘤之實驗動物的數據，篩選出未來值得推廣至產業界發展的中草藥，計畫並會開始分析活性中草藥成份活性。以期達承建立以「證據基礎」的目標，證實中草藥之抗肝癌血管新生與轉移功能。Item 以A549肺癌細胞株為模式篩選對非小細胞肺癌有治療潛力之中藥複方(2010) 王天駿; Tien-Chun Wang肺癌長期以來都是全世界致死率最高的癌症疾病。根據型態上和病理上的特徵分類之結果，絕大多數的肺癌病例屬於非小細胞肺癌。雖然現今已經發展出許多針對癌症的治療方法，卻依然沒有可以確實治癒癌症的方法。我們利用非小細胞肺癌細胞株A549為模式，篩檢十五種臨床上常用的中藥複方，期能找出能有效治療肺癌的替代性藥物。在細胞毒性的初步篩檢中，我們挑出三種可以有效抑制A549細胞生長卻不影響正常肺部組織細胞MRC5的中藥複方，分別是三號、五號及十四號藥方。在進一步的分析中發現，此三種複方的處理會造成A549細胞週期停滯進而抑制細胞的生長，但不會顯著地造成細胞死亡，同時我們也發現在經由三種複方的處理後，cyclin D3、cyclin B1、CDK4和CDK6這些細胞週期調控蛋白的表現，有顯著下降的現象，得到與細胞週期停滯現象一致之結果。此外，我們也發現三號及五號複方能有效地減少具有癌幹細胞特性的側群細胞(side population)的比率，而這個現象似乎與間葉表皮轉換(Mesenchymal to epithelial transition)的機制無關。我們也試著藉由檢測血管內皮新生因子A (VEGF-A)表現量去應證這些在中醫理論中具有活血化瘀效用的藥方是否對於癌症細胞分泌促血管增生因子的行為有調節的效用。本實驗的結果提供了分子生物學上的證據去解釋這些複方在臨床上可能的治病機轉以及中醫理論在分子生物學上的意義，更重要的是，我們發現三個中藥複方具有可以被用來抑制非小細胞肺癌細胞之潛力。Item 利用非小細胞肺癌細胞以及動物模式探討中草藥之治療潛力(2013) 韋會妤; Hui-Yu Wei非小細胞肺癌在肺癌中具有高發生率與致死率。文獻報導有許多中草藥含抑制腫瘤生長、血管新生和轉移的能力，同時伴隨較少的副作用。我們先前從十五種臨床上常用的中藥複方中，篩檢出三種對非小細胞肺癌細胞具有抑制能力的複方，分別為三號、五號及十四號藥方。已知此三種複方會造成A549細胞週期停滯進而抑制細胞的生長。我們更進一步使用非小細胞肺癌細胞株H460以及H520為細胞模式，評估這三種複方是否對非小細胞肺癌細胞具有一致的抑制效果，並以A549細胞株於雄性裸鼠進行腫瘤異種移植動物模式，以評估藥方的抗癌效果。在細胞模式中，我們利用細胞存活率(MTT assay)檢測十四號複方對非小細胞肺癌細胞株H460以及H520的半致死率，分別為4.5% 跟3.8%。此外，我們也發現十四號複方具有抑制細胞群落形成，以及造成細胞週期停滯在G1與G2的現象。在異種移植動物模式中，我們投予三種複方後發現三號以及十四號複方可減少腫瘤的大小，以西方墨點轉漬法進一步探討複方藥物處理的結果，我們發現這兩種複方可能藉由將腫瘤內細胞停滯在G2細胞週期以及誘導細胞凋亡的發生。本實驗的結果提供細胞以及動物實驗模式的結果顯示三號以及十四號複方可能具有抗腫瘤的潛力。Item 中草藥應用在緩解睡眠呼吸障礙的治療策略(2018) 鍾國棟; Chung, Kou-Toung人體睡眠時常因為上呼吸道阻力增加及呼吸肌肉收縮力下降造成呼吸障礙，症狀較輕時會引發打鼾現象，嚴重時則可能導致呼吸中止，這類與睡眠相關的呼吸障礙稱之為「睡眠呼吸障礙」。近年來，世界各國對睡眠呼吸障礙患病率居高不下，且有逐年增高的趨勢。鑒於現代西方醫學對於此類疾病尚無顯著療效，因此透過篩選有效治療呼吸系統疾病相關的傳統中草藥，應該可以作為有效緩解睡眠呼吸障礙的另類治療策略。本論文主要探討傳統中草藥可否有效改善睡眠呼吸障礙，本研究首先選出由地骨皮、天麻、桂皮等中藥組成的漢藥複方B210 ，利用大白鼠作為實驗動物模式，測量口服B210對於舒緩實驗動物呼吸障礙的功效。我們利用壓迫呼吸道誘發呼吸障礙的大白鼠作為動物模式，比較大白鼠經B210處理後對於鼾聲、喉頭血流、聲門面積、以及膈神經、喉返神經與舌下神經活動的影響，藉此檢測B210處理對於實驗動物呼吸障礙是否具有舒緩的功效。本研究實驗結果發現大白鼠經B210處理後可以明顯降低鼾聲、有效增加喉部肌肉血流、擴張吸氣時的聲門面積、以及顯著增加膈神經、喉返神經與舌下神經的吸氣活動放電、並且延長大白鼠的呼氣與吸氣的時間。綜合本論文研究結果顯示：B210處理對於實驗動物睡眠呼吸障礙確實具有顯著緩解的效果，因此可以作為緩解人類睡眠呼吸障礙的另類治療策略。