學位論文

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    一、探討新穎Indolylquinoline衍生物誘導非小細胞肺癌細胞凋亡機制 二、鑑定具有清除肺癌幹細胞的藥物
    (2014) 巫佩岑; Pei-Tsen Wu
    一.過去研究利用MTT assay以非小細胞肺癌細胞 (non-small cell lung cancer, NSCLC) 為平台篩選了逾五百種小分子化合物，發現含有indole 及quinoline這兩種官能基的小分子化合物compound A，於低劑量下，會抑制A549及H460這兩株NSCLC細胞生長速率及抑制A549腫瘤生長，但對抑癌基因p53缺失的H1299細胞株則無影響，接著使用western blot, MTT及flow cytometry，證實此藥物會誘導表現野生型p53的細胞產生凋亡，但是p53缺失的H1299細胞對此藥物的敏感度較低，而且不會出現凋亡。本論文內容是繼續探討此藥物對NSCLC細胞的調控生長機制與p53基因型的相關性。實驗主要是將p53缺失的H1299，分別轉殖入p53 DNA-binding domain 位點突變的p53R267P以及野生型p53的細胞株，其次再使用MTT 實驗，發現以此藥物10 µM處理H1299轉殖野生型p53細胞48小時後的生長速率較轉殖p53R267P敏感度高35％，繼續使用propidium iodide及Annexin V進行實驗，證實轉殖野生型p53細胞生長率的降低，是細胞凋亡造成，但以此藥物10 µM處理H1299/p53R267P細胞48小時後，細胞凋亡數目比例較H1299/p53細胞降低39.2％，最後由western blot確認細胞凋亡與p53及其下游poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) 裂解及caspase-3活化的蛋白質相關。這些實驗結果證明此藥物對表現野生型p53的H1299/p53細胞有最佳的治療效果，且野生型p53功能在此藥物誘導的凋亡機制中扮演了重要角色。未來實驗中將持續探討compound A如何降低腫瘤細胞生長，實驗會以癌症類幹細胞為模式，持續研究抑制腫瘤生長及轉移的機制。 二.中草藥療法在近幾年被重視，因為以中草藥搭配放射療法能減低癌症病患副作用，提升體質。本實驗以可能具有較高轉移能力及抗藥性的肺癌類幹細胞為模式，研究中藥苦參 (Sophora flavescens) 、鴨膽子 (Brucea javanica)、夏枯草 (Prunella vulgaris) 及西藥teroxirone 如何抑制肺癌類幹細胞生長。本實驗觀察幹細胞表面標誌Nanog，確認肺癌類幹細胞平臺的建立，接續使用螢光顯微鏡觀察幹細胞在這些藥物處理下，H460, H1299/p53及A549肺癌類幹細胞會隨藥物濃度及時間增加，其數目及形狀明顯的變少及變小，表示具有抑制肺癌類幹細胞生長的潛力，最後再以western blot實驗確認teroxirone會誘導H460肺癌類幹細胞走向p53依賴的細胞凋亡路徑。於先前研究中已知夏枯草可降低肝癌細胞的轉移力，苦參及鴨膽子可抑制A549腫瘤生長，此外，低劑量的teroxirone可抑制肺癌細胞生長及誘導細胞凋亡，所以日後將持續以此類模式探討這些藥物是否能抑制肺癌類幹細胞生長以及降低轉移能力。
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    探討三環藥物Teroxirone及吲哚基喹嚀藥物抑制人類非小細胞肺癌類幹細胞增生的機制
    (2016) 倪玉玲; Ni, Yu-Ling
    先前研究結果顯示三環衍生物teroxirone (1, 3, 5-triazine-2, 4, 6 (1H, 3H, 5H)-tri-one-1, 3, 5-tri-(oxiranylmethyl))及吲哚基喹嚀藥物EMMQ (3-((7-ethyl-1H-indol-3-yl)-methyl)-2-methylquinoline)具有抑制人類非小細胞肺癌生長的效果，雖然它的反應機制是透過細胞凋亡，然而卻因為殘存的癌幹細胞阻礙了藥物的完整活性。所以本論文的主要目的是想透過肺癌類幹細胞的培養模式探討teroxirone及EMMQ是否能夠根除潛在的肺癌幹細胞。首先須建立無血清以及低貼附性的特殊環境培養出肺癌類幹細胞球再進行後續的實驗。利用BrdU螢光染色和soft agar assay發現teroxirone與EMMQ可以抑制球狀細胞的生長、數量以及形成群落的能力。而以內差法計算soft agar assay的結果顯示，肺癌類幹細胞球所需的IC50遠高於貼附性細胞先前於MTT assay結果中所需的IC50，證明肺癌類幹細胞球確實具有較高的抗藥性。次以反轉錄聚合酶連鎖反應、西方墨點法及免疫螢光染色法證實teroxirone和EMMQ抑制肺癌類幹細胞的自我更新能力相關的幹細胞標誌基因，例如Nanog和ALDH1A1等。此外，TUNEL assay和西方墨點法的結果也顯示，teroxirone及EMMQ會誘發球狀細胞產生凋亡，最後以裸鼠皮下注射之腫瘤異種移植模式探討EMMQ之治療效果。根據論文的結論，teroxirone與EMMQ除了可以抑制貼附性肺癌細胞生長，若能適當地提高濃度也可以藉由細胞凋亡清除肺癌幹細胞。