學位論文
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Item 新穎抗癌藥物及其所影響之蛋白對於肺癌治療的效性探討(2010) 譚一泓; Yi-Hung Carol Tan目的：標靶治療是目前癌症治療的主要研究方向，大多數的肺癌患者對於化學療法或是放射線療法都有強烈的抗藥性，因此新穎的抗癌藥物以及新的治療目標是極需被開發研究的。在此論文的第一部分研究目的，希望鑑定新穎的小分子化合物OSU03013，是否可以作為肺癌新穎抗癌藥物。OSU03013其為舊藥celecoxib的衍生物，屬於cyclooxygenase (COX)-2的抑制劑。在攝護腺癌研究中證實OSU03013透過3-phosphoinositide- dependent kinase 1 (PDK1)/AKT訊息傳導路徑抑制腫瘤生長，此外，OSU03013也使用在乳癌的研究中。因此我們也希望能定義出OSU03013在肺癌中的目標蛋白及影響的生物路徑。此論文的第二部份是探討新穎c-Met抑制劑PHA665752對肺癌細胞生長及轉移的抑制作用，以及新穎治療目標基因Cbl (Casitas B-lineage lymphoma) 於肺癌病人檢體之突變情形。c-Cbl基因位於人類染色體11q23.3的位置，c-CBL蛋白目前已被發現主要參與細胞訊息傳導路徑以及酪氨酸激酶接受器（如：c-Met 和EGFR）的負調控角色，因此，本研究推測c-Cbl的突變或許是造成c-Met和EGFR過度表現的原因之一。此外，結合PHA665752 以及c-CBL 正常蛋白的共同抑制作用，或許可以成為新穎治療肺癌的策略。 實驗方法與設計：論文的第一部分，為了探討OSU03013是否有潛力成為新穎抗癌藥物，本研究利用肺癌細胞之毒殺作用及其細胞學鑑定，之後利用二維電泳、質譜分析等蛋白質體學的方法找尋藥物的目標及影響蛋白，並分析這些蛋白/訊息傳遞路徑與細胞生長調控的關係。論文的第二部分，利用肺癌細胞之毒殺作用來探討PHA665752的抑制效果，並利用基因定序及生物功能探討的方式，在總共一百一十九位來自台灣、美國白種人及黑人肺癌病人腫瘤組織中來研究c-Cbl的基因突變圖譜，並且在非小細胞肺癌細胞株中探討c-Cbl基因突變後影響細胞生長的狀況。此外，並利用c-Met抑制劑PHA665752及c-Cbl 正常基因轉染的共同處理，在細胞及動物實驗中來探討c-Met抑制劑及c-CBL正常蛋白對癌細胞的抑制作用。 結果：第一部分的結果指出OSU03013具有高度細胞選擇性毒殺作用，而此藥物對於肺正常細胞在相同濃度處理並沒有毒殺作用，所以是一個治療肺癌的潛力藥物。在細胞學鑑定實驗中，我們發現OSU03013的細胞致死劑量在48小時的測試下約1~4 M，會造成細胞週期停滯在間期一 (Gap 1, G1 arrest) 的現象；OSU03013在肺癌細胞同時也藉由內質網壓力效應去引發細胞凋亡 (apoptosis)。在蛋白質體學的實驗中，我們發現此藥物在肺癌細胞之目標蛋白包含了cAMP-dependent protein kinase inhibitor β form (PKIB, 激酶抑制蛋白)、數種G proteins (G蛋白)、數種Heat-shock proteins (熱休克蛋白)、Antioxidant enzymes (抗氧化蛋白)、及其他調控細胞生長、代謝的蛋白；這些蛋白有許多皆以Western blot (西方點墨法) 確認。經由分子模擬的實驗顯示，OSU03013會與ATP競爭然後與cAMP-dependent protein kinase (PKA)結合，並且抑制PKA的訊息傳導路徑，推測因此抑制了肺癌細胞生長。第二部份的結果指出，c-Met普遍過度表現於肺癌細胞中，而PHA665752對癌細胞具有毒殺作用、降低c-Met的表現，並且會引發早期細胞凋亡的機制。此外，一百一十九個肺癌病人樣本中，有一個已知的基因多型性變異 (signal nucleotide polymorphism) L620F以及八個位於表現子(exon)的c-Cbl突變型，其突變機率為百分之六點七。在三十七個台灣肺癌病人樣本中，有百分之二十一點六失去異合性(Loss of heterozygosity)的情形發生；另一方面，S80N/H94Y、Q249E、W802stop突變分別專一性發現於美國白種人、台灣人、非裔美人。在A549細胞中轉染此三種突變型c-CBL蛋白會導致細胞生長率以及移動能力的增加。最後，無論是在細胞或動物實驗中，將PHA665752以及c-CBL正常蛋白單獨或共同處理癌細胞有抑制其生長的現象，亦有抑制細胞轉移的情形。 結論：本研究為首篇在肺癌細胞中偵測OSU03013藥物之抑制癌細胞潛力，並由分子及蛋白質體學的研究結果發現此藥物會經由抑制PKA訊息傳導路徑來抑制癌細胞生長，並導致GSK3的去磷酸化，進而使在肺癌細胞中通常過度表現的-catenin被分解。此外，基於c-CBL可以負調控酪氨酸激酶接受器的表現，加上PHA665752亦可抑制c-Met在細胞中的過度表現，或許將來可以發展c-Cbl之基因治療，並且配合PHA665752的共同治療成為新的癌症治療方向。Item The effect of Chinese herbal medicine on migration and proliferation of liver cancer cells(2010) 金承勳; Kim, seunghun腫瘤細胞中，與基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）抑制劑可藉由許多不同的訊息傳遞路徑，達到具有抑制血管新生及細胞增生的效果。過去對於中草藥調節血管新生的作用機轉較少被探討。本研究使用各種不同中草藥投至人類肝癌細胞（HepG2，Hep3B及Huh 7），先以細胞存活率試驗及流式細胞儀篩選具生長抑制的藥物。實驗結果顯示，夏枯草最具抑制轉移的中草藥，它可藉由抑制MMP-9及MMP-2的蛋白質表現以抑制其蛋白質活性，此外也由wound healing assay及zymography證實這項實驗結果。 本論文根據過細胞模式上的研究成果，初了強化過去的研究外，也會繼續進行動物層次研究，積極由肝癌腫瘤之實驗動物的數據，篩選出未來值得推廣至產業界發展的中草藥，計畫並會開始分析活性中草藥成份活性。以期達承建立以「證據基礎」的目標，證實中草藥之抗肝癌血管新生與轉移功能。Item 短耳鴞在臺灣的度冬生態學(2016) 曾威; Tseng, Wei因為棲地消失或破碎化，自1970年來全球短耳鴞族群有逐年下降的趨勢。族群下降的原因主要是人為活動導致繁殖地及度冬地棲地的破壞。臺灣雖然是短耳鴞的度冬地之一，但是對短耳鴞度冬基礎棲地利用資訊瞭解甚少。本研究以無線電追蹤短耳鴞的活動範圍與棲地利用，收集2013及2015年冬季12隻短耳鴞追縱資料，分析短耳鴞日棲點及夜棲點棲地利用類型。經由臺中市野生動物保育學會從臺灣機場防鳥擊網繫放救傷的資料，分析2007年至2015年短耳鴞來臺灣度冬數量、來台時間、捕捉地點以及性別比例，期望瞭解度冬短耳鴞在臺灣的棲地利用模式與度冬期資訊。繫放資料顯示短耳鴞在臺灣度冬期起始於每年10月，結束於隔年5月，由捕獲數量推測短耳鴞每年度冬高峰為12月。度冬期雌鳥比例偏高，佔族群的75%。追蹤期間的活動範圍在性別之間無顯著差異，短耳鴞利用多個核心區域，核心區域利用總和介於13公頃至2282公頃之間，平均為444公頃，單個核心區域利用介於0.2公頃至897.0公頃之間，平均為158.9公頃，顯著大於北美繁殖地的核心利用區域。不同性別棲地利用類型並無顯著差異。短耳鴞傾向利用草生地做為日棲點，而利用農業用地做為夜棲點。核心區域平均利用天數10.4天，顯示在小尺度上棲地忠誠度高；但是在追蹤期間利用多個核心區域（平均數量2.3個），推測可能因棲地品質差而導致游牧型的棲地利用模式。顯示農地與草地的棲地形態對短耳鴞的度冬是重要的因子。