學位論文

Permanent URI for this collectionhttp://rportal.lib.ntnu.edu.tw/handle/20.500.12235/73908

Browse

Has files: NoSubject: search.filters.subject.Spinocerebellar ataxias

Search Results

Now showing 1 - 3 of 3
  • No Thumbnail Available
    Item
    SCA8誘導型細胞之分子探討
    (2010) 莊婉君; Wan-Chun Chuang
    脊髓小腦萎縮症第八型是一種晚發型自體顯性遺傳的神經退化疾病，其致病的原因是由於染色體13q21上的ATXN8OS基因在3’ 端外顯子上有一段不正常擴增的CTG三核甘酸所造成。目前對於此疾病的詳細致病機轉尚未了解，早期相關文獻指出ATXN8OS基因並不具有轉譯蛋白質的功能，然而，最近的文獻對於ATXN8OS基因，以及其對應股的ATXN8基因，支持一種雙向轉錄的機制假說，也就是說ATXN8基因有可能因為CAG擴增而轉譯出PolyQ蛋白質；而ATXN8OS基因則是會轉錄出帶有CUG擴增的致病RNA，因此SCA8的致病機制有可能會由蛋白質以及RNA兩種層面而致。為了更進一步了解SCA8致病的分子機制，我們實驗室以大鼠嗜鉻瘤細胞株(PC12)，建立了帶有正常重複範圍(22R)以及不正常擴增(150R)兩種CTG擴增的基因片段的誘導型系統，希望以離體的模式快速觀測ATXNOS基因過度表現會對於神經細胞所產生的影響。從實驗中我們發現帶有致病範圍CTG擴增(150R)的細胞經過誘導基因表現之後，在細胞存活率，以及在神經分化長出的神經突起長度皆有降低的趨勢；除此之外，我們也在細胞內觀察到RNA foci的形成。由這些研究結果，我們可以發現ATXN8OS基因的過度表現會對神經細胞造成傷害，而我們也進一步想研究ATXN8OS基因過度表現是否對於與PC12細胞神經分化有關的一些訊息傳遞路徑造成影響，結果發現經由ATXN8OS基因過度表現所造成的神經分化不良，並非是直接影響其引導神經分化的訊息傳遞路徑，是否和RNA層面alternative splicing有關，進而影響一些調節因子及轉錄因子，則需要進一步相關的研究。
  • No Thumbnail Available
    Item
    第十七型脊髓小腦萎縮症年輕轉殖小鼠聲門功能異常之研究
    (2011) 賴佳音; Chia-Ying Lai
    脊髓小腦萎縮症（Spinocerebellar ataxias；SCA )，是一種漸進性的神經退化性疾病，目前發現有二十八種不同類型，其中第十七型主要症狀是步伐不穩、吞嚥與發音困難、肌肉張力失調、震顫性麻痺、眼球震顫、聽覺遲緩、漸進的癡呆、癲癇等，致病原因是TATA-box結合蛋白(TATA-box binding protein)上的的N端有一段CAG三核苷重複過度擴增，形成過長的多麩醯胺酸 (polyglutamine ; polyQ) 突變蛋白，並引起這種蛋白沉澱，導致細胞毒性，以致於產生神經元退化。吞嚥與發音困難可能與聲門運動功能異常有關，管制聲門運動的神經主要是喉返神經，唯也受到橋腦的調節，臨床上發現脊髓小腦萎縮症的病人，其橋腦也有發生萎縮，橋腦是呼吸調節中樞 (pneumotaxic center)的所在，也涉及聲門運動的調控。我們實驗室過去曾利用SCA17轉殖鼠為實驗材料，發現SCA17轉殖鼠在六個月時，聲門運動的調控機制不佳。問題是六個月的小鼠已經是年老的動物，我要問的問題是年輕轉殖小鼠（二到三個月）是否也會呈現聲門運動調控機制異常，這一點非常重要，可以告訴我們年輕病人是否也有吞嚥與發音的問題。研究分成兩大部分，第一，利用辣椒素刺激肺部的無鞘神經C纖維，引起反射作用，觀察喉返神經呼吸活動的反應，結果發現年輕轉殖小鼠，低劑量辣椒素所引起反射作用是，血壓下降、心跳減慢及呼吸暫停，與野生小鼠無異，在呼吸暫停期間，喉返神經呼氣活性（也稱吸氣後活性）顯著上升，這種上升反應既見於自主呼吸的轉殖小鼠，也發生在麻痺且以人工呼吸機送氣的轉殖小鼠，但是人工送氣下的轉殖鼠，反應卻遠遠小於野生型小鼠;第二是觀察其聲門運動，結果發現，在一般情況下，野生小鼠吸氣時面積顯著大於轉殖鼠，但呼氣時候面積並無差異，在給予辣椒素引起呼吸暫停期間，轉殖小鼠與野生小鼠的聲門都會內收且關閉，在呼吸恢復後回復後的第一次呼吸週期，聲門面積對照面積相比並無差異。這些結果說明，年輕的SCA 17轉殖小鼠其聲門運動對辣椒素引起的反射反應與野生型動物相似，也暗示轉殖小鼠聲門的調控機制可能正常。
  • No Thumbnail Available
    Item
    透過調控泛素蛋白酶體系統作為第三型多麩醯胺小腦萎縮症的治療策略
    (2017) 張家寧; Chang, Chia-Ning
    脊髓小腦萎縮症(SCA)為體染色體顯性遺傳之神經退化性疾病，其中第1、2、3、6、7、8、17型SCA及齒狀核紅核蒼白球路易體萎缩症(DRPLA)皆起因於特定基因中CAG三核苷酸不正常擴增，進而轉譯出長鏈的多麩醯胺(PolyQ)蛋白。錯誤摺疊的擴增多麩醯胺蛋白傾向於細胞中形成聚集(Aggregation)，此為多麩醯胺疾病(PolyQ disease)之共同病徵。當神經元內累積過多不可溶之聚集，將導致神經元功能障礙，引發漸進性脊髓小腦共濟失調。第三型脊髓小腦萎縮症(SCA3)於眾多亞型中最為常見，患者因座落於14q32.1的ATXN3基因發生突變而致病，在正常人基因中CAG三核苷酸重複約13~36次，但患者基因中重複次數會高達68~79次。由於突變多麩醯胺蛋白的累積為致病主要始因，故透過調控泛素蛋白酶體系統(Ubiquitin proteasome system)活性，以清除聚集的多麩醯胺蛋白，進而抑制聚集導致的細胞毒性，減少神經元死亡，對治療SCA3具有潛力。先前本實驗室使用SCA3 ATXN/Q75-GFP 293細胞株，對順天堂公司提供的中草藥水萃物進行檢測，篩選出14種具抑制PolyQ聚集效果的中草藥水萃物。本研究接續上述結果，利用泛素蛋白酶體系統表達細胞(GFPu)，經流式細胞儀分析，初步篩選出8種顯著提升蛋白酶體活性之水萃物，並以20S蛋白酶體活性分析及西方轉漬法分析泛素化及GFP蛋白確認之。其次鎖定其中5種中草藥水萃物，利用誘導神經分化的ATXN3/Q75-GFP SH-SY5Y細胞，經分析聚集、神經突生長(Neurite outgrowth)、凋亡蛋白酶3 (Caspase 3)活性、蛋白酶體活性，及ATXN3/Q75-GFP、泛素、Bcl-2、Bax等蛋白表現量，確認中草藥水萃物之神經保護效果。最後針對其中兩種中草藥水萃物之3種活性成分，以GFPu細胞及ATXN3/Q75-GFP SH-SY5Y細胞，分別確認其活化蛋白酶體及神經保護效果。此研究希冀能提供SCA3等多麩醯胺疾病良好的治療策略。